Dr Belgacem Habiba
Université DR Moulay Tahar Saida.
Département Des Sciences De la Nature et de La vie
Master 1 Microbiologie Appliquée
TP 07 : Techniques expérimentales Préparation des solutions et des Tampons
Préparation d’une solution :
On désire préparer des solutions de bleu de Coomassie (PM =855,028 ± 0,054 g/mol) dans 10 ml d’eau distillée selon les concentrations suivantes :
- 0,5 % (concentration pourcentage)
- 0,5 mM (concentration molaire)
- 0,5 g/l (concentration pondérale)
- Calculer la masse du bleu de Coomassie à peser pour chaque concentration.
- Préparer les solutions selon le mode opératoire suivant :
- Peser la quantité désirée du bleu de Coomassie en utilisant une balance électronique et une coupelle ou un verre de montre ;
- Solubiliser la quantité dans un peu d’eau distillée puis compléter le volume jusqu’à 10 ml ;
- Agiter pour accélérer la dissolution et homogénéiser la solution
- À partir de ces trois solutions mères du bleu de Coomassie, vous préparez les dilutions suivantes :
- 1 ml d’une solution de concentration 0,3 g/l ;
- 2 ml d’une solution de concentration 0,05 g/l ;
- 3 ml d’une concentration 0.025g/l
- À partir de ces trois solutions mères du bleu de Coomassie, vous préparez des dilutions simples et successives ½, 1/3, ¼, 1/6, …
Préparation d’un Tampon :
- Préparation d’un tampon par mélange d’un acide faible et de sa base conjuguée : exemple le tampon phosphate (2mM, pH = 7)
- Acide NaH2PO4 (PM = 138g/mole), 100ml.
- Base Na2HPO4 (PM = 142g/mole), 100ml.
Pour préparer ce tampon, il faut suivre les étapes suivantes :
- préparer la solution acide par solubilisation de la quantité désirée du NaH2PO4 dans l’eau distillée ;
- Préparer la solution basique par solubilisation de la quantité désirée du Na2HPO4 dans l’eau distillée ;
- Ajuster le pH de la solution basique à pH = 7 par addition successive de la solution acide.
- Préparer d’un tampon par mélange d’un acide fort et d’une base faible : exemple, le tampon Tris-HCL (2 mM, 100 ml, pH = 6,2).
- Acide fort : HCL
- Base faible : Trizma base
De la même manière que le tampon phosphate, vous préparez la solution basique (Trizma base), puis vous ajustez le pH à 6.2
par addition goutte à goutte de l’acide fort HCL.